液相色谱技术课件——色谱分析技术交流
高效液相色谱柱选型与维护
高效液相色谱柱内容提要：
hplc分析方法建立
色谱柱结构 了解色谱柱结构
直管型液相色谱柱卡套型保护柱，柱前过滤器
色谱柱类型 选择色谱柱类型
按液相色谱分离模式色谱条件优化
色谱柱参数 熟悉填料参数
填料种类、粒径、孔径、载量、比表面积等参数对分析分离的影响。
色谱柱维护
色谱柱使用常见问题和清洗维护
分析型及半制备型色谱柱构型
从材质上分：不锈钢和peek（聚醚醚酮）材质peek 材质优缺点——样品对金属离子比较敏感时，选择peek材质比较合适，比如某些蛋白分析会用到peek材质的分析柱，主要***是考虑到这方面的因素；
不锈钢材质优缺点——大部分小分子化合物的分析，选择不锈钢材质色谱柱居多，特别是当流动相
体系使用到四氢呋喃（thf）或dmso等一些溶解性较强的溶剂时，必须选择不锈钢材质
通过可控的聚合反应或其他项分离技术直接形成连续、整体型柱床
保护柱构型
结构上分：卡套式（柱芯加柱套）和直接填装的短柱
直接填装短柱优缺点——实质***是短的色谱柱，填装的填料跟分析柱填料******一样。生物样品分析中，用这种类型保护柱居多，除可过滤一些不溶颗粒外，还可除去一些在分析柱上易吸附的杂质。缺点是，一次性使用，污染严重时，只能报废。
卡套式保护柱优缺点——可反复使用，柱芯污染后可替换，厂家会提供配套的保护柱芯，但购买时需要注意，柱芯中有与分析柱匹配的填料，需要确认柱芯中的填料类型再购买。
保护柱——不同连接方式
连接方式上分：独立式和直连式
独立式保护柱优缺点——保护柱和分析柱之间需要一段管路连接，连接不当容易产生死体积。
直连式保护柱优缺点——保护柱接口可直接与分析柱连接，死体积小，uplc分析时建议用直连式保护柱；缺点：购买时需******接口与分析柱匹配。
保护柱选择考虑以下几方面因素：
•除非特殊情况，一般选择填料基质与分析柱基质******相同的保护柱。
•选择保护柱尺寸可按柱体积计算，保护柱体积按分析柱体积的5%~10%即可；
保护柱与柱前过滤器的区别和使用
使用保护柱的目的在于延长分析柱的使用寿命，当分析柱造价昂贵时，保护柱的价值尤其能体现，某些情况下，当使用的分析柱本身******便宜，保护柱并非必选，推荐使用柱前过滤器更合适。
柱前过滤器与保护柱两者外形相似，差异主要在于：保护柱内芯装有填料，而柱前过滤器内芯是可更换的滤片（一般为带孔的不锈钢烧结板）
柱前过滤器——通用性强，任何分析柱前都可使用，因其滤芯只起到过滤和截留杂质的作用，滤片污染后可超声清洗，反复使用。
保护柱——柱中填料除了起截留杂质的作用外，也可除去样品中易吸附的杂质，这一点对生物样品分析尤其重要。
保护柱使用注意事项 :
• 独立式保护柱与分析柱连接时，连接管路尽可能短，且接口切面平滑，尽量减少死体积以降低柱外展宽效应。
•卡套式保护柱一般未标注液流方向，使用时******自行标注，并按照标注方向来使用，以免正反向使用后，截留的杂质污染分析柱。
•直接填装的短柱型保护柱，出现柱压升高或峰型变差时，可不接分析柱进行反向清洗，清洗溶剂可参考分析柱清洗溶剂。
•保护柱或柱芯一般不建议超声清洗，因可能对填料表面修饰有影响。
•如同一保护柱配不同的分析柱使用，每次使用前，保护柱需先清洗并用流动相平衡保护柱一段时间后，再接色谱分析柱使用。
关于色谱柱参数，色谱柱维护 ，色谱柱类型，请关注后面的更新文章。或者咨询成都摩尔科学仪器有限公司